GB/T 14926.51-2001 实验动物 免疫酶试验

前 言 

本标准修订了 GB/T 14926.18-1994《实验动物淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的免疫酶试验方法,将其作为一个独立标准列出。

本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口， 

本标准起草单位:中国实验动物学会。

本标准主要起草人:贺争鸣。

范围 

本标准规定了免疫酶试验(IEA)所用试剂、器材和操作步骤等。 

本标准适用于实验动物病毒抗体的检测。 

原理 

含有病毒抗原的细胞固定于玻片上,遇相应抗体形成抗原抗体复合物。

此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性,可与相应的第二抗体酶结合物结合,遇酶底物产生颜色反应。

在普通显微镜下,根据颜色的反应判定结果。

 3 主要试剂与器材 

3.1 试剂 

3.1.1 抗原片 

3.1.1.1 抗原片的制备 将病毒接种敏感细胞(表1),待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后,用胰酶消化分散细胞,PBS洗涤三次,最后用适量 PBS 悬浮细胞。将细胞悬液滴于玻片孔内。

同时消化不感染病毒的同批同种细胞,滴加同一玻片另一孔内,作为正常细胞对照。孔内滴加的细胞以细胞铺开,不重叠为 宜。室温干燥后,冷丙酮(4℃)固定 10 min。用蒸馏水漂洗后充分干燥,置于-20℃备用。

3.1.1.2 抗原片的鉴定每批抗原片在使用前,用相应的阳性血清和阴性血清进行鉴定。鉴定方法可用IEA或免疫荧光试验。

在阴性血清与正常细胞和病毒感染细胞反应无色:阳性血清与正常细胞反应无色,而与病毒感染细胞呈棕褐色,且阳性细胞数达 30%~50%时,此批抗原片可以使用。

3.1.2 酶结合物 抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、免、犬或猴IG抗体辣根过氧化物酶结合物用于检查相应动物的血清抗体。葡萄球菌蛋白 A(SPA)辣根过氧化物酶结合物可代替抗小鼠、豚鼠、免、犬和猴IgG抗体辣根过氧化物酶结合物使用。

 3.1.3 阳性血清 用病毒抗原免疫清洁或 SPF 级小鼠,大鼠,豚鼠,地鼠或普通级免,犬,猴所获得的抗血清:或自然感染恢复后的犬、猴血清。 

3.1.4 阴性血清 清洁或 SPF 级小鼠、大鼠、豚鼠,地鼠血清;或确认无相应病毒感染的免、犬、猴血清。