范围
本标准规定了实验动物肺炎克雷伯杆菌的检测方法。
本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、免肺炎克雷伯杆菌的检测。
2引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T14926.42-2001实验动物细菌学检测标本采集GB/T 14926.43-2001实验动物 细菌学检测染色法、培养基和试剂
原理
肺炎克雷伯杆菌在培养基上有特定的生长、形态和生理生化特征
主要设备和材料
普通恒温培养箱
培养基和试剂
5.1 DHL琼脂平皿。
5.2克氏双糖铁或三糖铁琼脂、
5.3糖发酵培养基。
缓冲葡萄糖蛋白胨水(甲基红、V-P试验用)。5.4
5.5蛋白胨水、靛基质试剂。
5.6酉蒙氏柠檬酸盐培养基。
5.7丙二酸钠培养基。
5.8氨基酸脱羧酶试验培养基、
5.9尿素培养基。
5.10 半固体琼脂培养基。
7 操作步骤
7.1 采样
回盲部内容物或病灶组织等。
7.2 分离培养
将已接种的DHL琼脂置(36±1)℃培养18~24 h。
7.3 鉴定7.3.1 菌落特征肺炎克雷伯杆菌在 DHL,琼脂平皿上形成菌落淡粉色,大而隆起,光滑湿润,呈粘液状,相邻菌落易融合成脓汁样,接种针挑取时可拉出较长的丝。
7.3.2 菌体特征革兰阴性短杆菌,大小为(0.3~0.5)mmX(0.6~6.0)μm,单个、成双或成短链排列,有荚膜。病变组织直接涂片,呈卵圆形或球杆状,菌体外有明显荚膜,较菌体宽2~3倍。连续传代后荚膜消失;无芽孢。
7.3.3 本菌转种克氏双糖或三糖铁琼脂培养基(36士1)℃培养18~24h,斜面产酸,底层产酸产气,或仅产酸不产气,硫化氢阴性。
7.3.4 生化鉴定
V-P试验阳性,硝酸盐还原试验阳性,M.R阴性,西蒙氏柠檬酸盐利用实验阳性,丙二酸盐试验阳
性,尿素酶阳性、赖氨酸脱羧酶阳性、鸟氨酸脱羧酶阴性,利用葡萄糖和乳糖,靛基质阴性。
7.3.5 半固体动力试验阴性。
8 结果报告
凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告,不符合者作出阴性报告。
