前言
本标准是对GB/T14926.18-1994《实验动物 巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》的修订。本标准删除了GB/T14926.18-1994中“酶联免疫吸附试验,间接免疫荧光法和免疫酶染色法”的内容。
本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口，
本标准起草单位:中国实验动物学会。
本标准主要起草人:贺争鸣，
本标准于1994年1月首次发布
范围
本标准规定了淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)的检测方法、试剂等本标准适用于小鼠、豚鼠、地鼠1CMV 的检测。
引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性GB/T14926.50-2001 实验动物酶联免疫吸附试验GB/T 14926.52-2001实验动物免疫荧光试验
GB/T 14926.51-2001实验动物免疫酶试验
原理
根据免疫学原理,采用LCMV抗原检测小鼠、豚鼠、地鼠血清中LCMV抗体
主要试剂和器材
4.1 试剂:
4.1.1 ELISA 抗原
4.1.1.1 特异性抗原
在生物安全柜内,用1.CMV感染Vero 细胞,当病变达十十十~十十十十时,收获培养物。冻融三次或超声波处理后,低速离心去除细胞碎片,上清液再经超速离心浓缩后制成ELISA 抗原4.1.1.2 正常抗原
Vero 细胞冻融破碎后,经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液，
4.1.2 抗原片在生物安全柜内,1.CMV感染Vero细胞,每2~3d更换维持液,培养7~10d,用IFA法测定细胞内特异性荧光。当荧光达十十~十十十时,将细胞用胰酶消化分散,PBS洗涤,涂片。室温干燥的同时，在紫外线下20cm处照射30min,冷丙酮固定10min，-20℃保存。
4.1.3 阳性血清
用8-丙内脂灭活1CMV抗原,免疫清洁或SPF小鼠、豚鼠、地鼠所获得的抗血清
4.1.4 阴性血清
清洁或SPF小鼠、豚鼠、地鼠血清
4.1.5 酶结合物
辣根过氧化物酶标记羊或免抗小鼠、豚鼠、地鼠IgG抗体,用于检测相应动物血清抗体;辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A(SPA)可用于检测小鼠、豚鼠、地鼠血清抗体。4.1.6 异硫氰酸荧光素标记羊或免抗小鼠、豚鼠、地鼠IgG抗体,用于检测相应动物血清抗体
4.2 器材
4.2.1 酶标仪。
4.2.2荧光显微镜
4.2. 3普通显微镜。
4.2.4 37C培养箱或水浴箱
检测方法
5.1 采用ELISA 方法(见GB/T 14926.50-2001)进行血清学检测
5.2 采用IFA方法(见GB/T 14926.52-2001)进行血清学检测。
5.3 采用IEA方法(见GB/T 14926.51-2001)进行血清学检测。
结果判定
对阳性检测结果,选用同一种方法或另一种方法重试。如仍为阳性则判为阳性。
结果报告
根据判定结果，作出报告
