前言
本标准是对GB/T14926.41-1994《无特定病原体动物、无菌动物生活环境及粪便标本的检验方法》的修订。
本标准删除了GB/T14926.41-1994中对无特定病原体动物生活环境及粪便标本的检验,保留无菌动物生活环境及粪便标本的检测并作了如下修改:增加了硫乙醇酸钠培养基在使用前需煮沸驱氧程序;在从液体培养基转种血琼脂平皿时增加涂片染色镜检,以防止在转种时因死亡细菌不能在血平皿上生长而漏检。
本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口，
本标准起草单位:中国实验动物学会。
本标准主要起草人:李红。
本标准于1994年1月首次发布。
范围
本标准规定了无菌动物生活环境及粪便标本中细菌的检测方法，本标准适用于无菌小鼠、大鼠、豚鼠,地鼠和免的微生物检测。
引用标准
2
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T14926.43-2001实验动物细学检测染色法、培养基和试剂
原理
污染无菌动物的微生物主要是细菌(需氧菌和厌氣菌)和真菌,所以通过不同的培养基、不同的培养温度和培养环境可以对污染菌进行检测。
4 主要设备和材料
4.1 普通恒温培养箱
4.2生化培养箱。
4.3水平流洁净工作台。
4.4 恒温水浴箱。
5培养基及试剂
5.1 脑心浸被肉汤
5.2硫乙醇酸钠肉汤
5.3大豆蛋白胨肉汤
5.4血琼脂平皿。
5.5无菌生理盐水。
操作步骤
7.1 采样
将无菌隔离器内饮水、饲料、垫料和新鲜动物粪便等分别收集于无菌小试管中,按无菌动物饲养操作程序从隔离器中取出。
7.2 接种及观察
7.2.1 将硫乙醇酸钠培养基加热煮沸至无色,置45℃水浴箱平衡温度。7.2.2 按无菌操作程序在水平流洁净工作台中进行样品接种前制备及接种。分别加入少量无菌生理盐水(以没过样品为宜)于待检样品小试管中,用毛细吸管充分吹打。分别吸取0.1~0.5ml,样品溶液于上述三种培养基中,其中脑心浸液培养基和确乙醇酸钠培养基置(36士1)℃培养至少14d,并在培养第7d和第14d涂片,革兰染色镜检,同时接种血琼脂平皿,(36士1)℃培养48h,观察有无细菌生长;大豆蛋白胨肉汤培养基置25~28℃培养至少14d,观察有无真菌生长:
结果报告
凡镜检未观察到细菌、血琼脂平皿上无细菌生长、大豆蛋白胨培养基无真菌生长者可报告无菌检测合格,其中一项检出细菌或真菌者为不合格。
