范围
本标准规定了实验动物肺炎链球菌的检测方法。
本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和免肺炎链球菌的检测。
引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T14926.42-2001实验动物细菌学检测标本采集
GB/T14926.43-2001 实验动物细学检测染色法、培养基和试剂
原理
肺炎链球菌是《溶血性的革兰阳性球菌,且具有特定的生化反应特征,因此,通过血平皿培养和生化试验等,可与其他细菌区别。
4 主要设备和材料
4.1 普通恒温培养箱。
4.2 生物显微镜。
5 培养基和试剂
5.1 葡萄糖肉浸液培养基。
5.2血琼脂平皿。
5.3血清肉汤培养基。
5.4菊糖发酵管
5.5荚膜染色液
5.6革兰染色液。
5.710%去氧胆酸钠溶液
5.8 Optochin 纸片。
7 操作步骤
7.1 采样
采取呼吸道分泌物或病灶组织或分泌物。
7.2 分离培养
7.2.1 直接分离培养
将已接种的血琼脂平皿置(36士1)℃培养24~48h。7.2.2 增菌分离培养
将已接种葡萄糖肉浸液培养基置(36士1)℃增菌培养12h后,转种血琼脂平皿,置(36士1)℃培养24~48 h
7.3 鉴定
7.3.1 菌落特征
血琼脂平皿上形成圆形,扁平,周围有狭窄草绿色溶血环(a溶血)菌落。随培养时间的延长,由于自溶作用使菌落呈肚脐状。7.3.2 菌体特征
革兰阳性双球菌、钝头相对、尖头相背、似矛头状,有时呈短链排列。
7.3.3 荚膜染色鉴定菌株接种血清肉汤中,(36士1)℃培养12h,进行英膜染色,肺炎链球菌在最初几代英膜染色阳性。
7.3.4 菊糖发酵试验
多数菌株呈阳性反应
7.3.5 Optochin 试验
纯培养物划线接种于血琼脂平皿上,将含有5g、直径6mm的Optochin 纸片平放于琼脂表面,(36士1)℃培养24h,出现15mm以上的抑菌圈者为阳性;若直径小于15mm,应做胆盐溶解试验来确定。
7.3.6胆盐溶解试验取血清肉汤培养物1.0mL,分装两个试管,各0.5mL。一支加人10%去氣胆酸钠0.5mL,一支加人0.5ml,生理盐水作对照。摇匀置于37℃温箱3h,每小时观察一次,在3小时内溶液透明者可判断为阳性。在加胆盐前必须把pH调至7.0。
7.3.7 肺炎链球菌和甲型链球菌的鉴别见表1。
8报告结果
凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告,不符合者作出阴性报告
