范围
本标准规定了实验动物嗜肺巴斯德杆菌的检测方法。
本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔嗜肺巴斯德杆菌的检测。
引用标准
下列标准所包含的条文,通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时,所示版本均为有效。所有标准都会被修订,使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T14926.42-2001实验动物细学检测标本采集
GB/T14926.43-2001 实验动物 细菌学检测染色法、培养基和试剂
原 理
嗜肺巴氏杆菌为革兰阴性小杆菌,主要寄居于啮齿类和免类的上呼吸道,该菌具有特殊的生化反应,萌体可与相应的免疫血清在玻片上形成肉眼可见的凝集反应,据此可进行该菌的分离培养和检测。
4 主要设备和材料
4.1 普通恒温培养箱、
4.2 生物显微镜。
5 培养基和试剂
5.1血琼脂平皿、
双糖铁或三糖铁琼脂
5.3DHL 琼胎平皿。
硝酸盐还原试验培养基，5.4
5.5西蒙氏柠檬酸盐琼脂。
5.6蛋白胨水、靛基质试剂，
5.7尿素培养基。
5.8乙酸铅纸条
5.9氧化酶试剂，
5.10 过氧化氢酶试剂。
5.11嗜肺巴斯德杆菌诊断血清、
7 操作步骤
7.1 采样
采取呼吸道分泌物或病灶组织或脓汁。
7.2分离培养
将接种的血平皿置(36士1)℃培养18~24h。
7.3 鉴定
7.3.1 菌落特征
血琼脂平皿上(36±1)℃培养18~24h可形成1~2mm、光滑露滴样或灰白色,不溶血或轻微a溶血的菌落。纯培养物堆集时呈现黄色,质地似奶油。
7.3.2 菌体特征革兰阴性小杆菌,两端钝圆并浓染,在生长初期也可见较细长的杆菌。7.3.3 双糖铁或三糖铁培养基上(36士1)℃培养18~24h,斜面产酸,底层产酸或不变色,不产气,乙酸铅纸条法显示硫化氢阳性。
7.3.4 生化反应
大量接种情况下多数菌株产生靛基质。明胶液化试验阴性。硝酸盐还原试验阳性、尿素阳性、过
氧化氢酶阳性、氧化酶弱阳性。7.3.5 纯培养物接种DHL培养基(36士1)℃培养24h不生长,延长培养时间在大量接种区可长出极小菌落。半固体动力试验阴性。
7.3.6 本菌与多杀巴斯德杆菌和支气管鲍特菌的鉴别见GB/T14926.5-2001中表1。
7.3.7 血清玻片凝集试验阳性。
结果报告R
凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告,不符合者作出阴性报告
