目的 制备兔抗猪抑制素多肽偶联钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)多克隆抗体,探究其对C57BL/6J小鼠超数排卵的影响。

方法 将人工合成的猪抑制素多肽偶联KLH蛋白免疫新西兰白兔,制备抗抑制素血清(anti-inhibin serum, AIS,即抑制素多克隆抗体)。将纯化后的AIS联合孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin, PMSG)经腹腔注射雌性C57BL/6J小鼠,48 h后再注射人绒毛膜促性腺激素(humanchorionic gonadotropin, hCG)诱导超数排卵,15 h后收集并计数超数排卵获得的卵母细胞数;在体外受精24 h 后检测2-细胞期胚胎数。

结果 将KLH免疫新西兰白兔后制备AIS,采用间接ELISA法测定AIS效价,结果显示其效价可达1 ∶512 000; AIS经硫酸铵沉淀法纯化后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,结果显示在分子量为50 kDa 及25 kDa处均出现了清晰可见的条带,符合免疫球蛋白G抗体亚型重链和轻链的理论分子量大小,表明成功制备出猪抑制素多克隆抗体。 与常规超数排卵方法相比,AIS 10倍稀释联合PMSG处理可以显著增加小鼠超数排卵产生的卵母细胞数量(P<0.05),约为常规PMSG处理的1 .5倍。

结论 本研究制备的猪抑制素多克隆抗体作为改良超数排卵试剂,可以提高C57BL/6J小鼠的超数排卵效果,在后续的市场应用中有较大前景。

原文阅读:猪抑制素多克隆抗体对C57BL/6J小鼠超数排卵的增效作用.pdf