目的 探讨环孢素A( CsA)诱导的肾纤维化( RF)中去整合素金属蛋白酶 17( ADAM17)对于内质网应激( ERS)的调控机制,挖掘RF进程的新靶点。
方法 CsA灌胃建立SD大鼠 RF模型,采用质粒转染技术和siRNA技术,将动物体内ADAM17过表达或敲低。 测定大鼠体质量、尿蛋白/肌酐比值( UPCR)、血清尿素氮( BUN)、血清肌酐( SCR)、胱抑素 C ( Cys-C)、转化生长因子- β1( TGF-β1)、 ADAM17 的变化;HE染色、Masson染色观察肾脏组织病理改变;透射电镜观察肾脏组织超微结构变化;免疫荧光法检测ADAM17、葡萄糖调节蛋白78( GRP78)共表达;RT-qPCR检测肾脏组织TGF-β1、 Smad3、 α -平滑肌肌动蛋白( α-SMA)、 Ⅰ型胶原蛋白α1链( COL1A1)、 ADAM17、 GRP78、肌醇需要酶 1 ( IRE1)、激活转录因子6 ( ATF6)的mRNA 表达; Western blot检测ADAM17、 Smad3、 TGF-β1、 α-SMA、 COL1A1、 GRP78蛋白的表达。
结果 模型 1组大鼠较空白对照1组体质量下降( P<0 . 01) ,UPCR、血清肾功能指标( SCR、 BUN、 Cys-C)极显著升高( P< 0 . 0001) ;形态学检测肾脏组织出现肾间质纤维化等病理变化;RF相关指标TGF-β1、 Smad3表达上调( P< 0 . 001) ,并伴随着 ADAM17、 GRP78 的异常表达( P< 0 . 01)。 过表达ADAM17( P< 0 . 0001) ,大鼠同样出现体质量下降、 UPCR升高、血清肾功能指标升高( P<0 . 01)以及RF 的病理变化;RF相关指标TGF-β1、 Smad3、 α-SMA、 COL1A1均不同程度升高( P< 0 . 05)。 同时,ERS相关因子GRP78、ATF6、 PERK表达不同程度上调( P< 0 . 05) ;反之,敲低模型组大鼠的ADAM17相关指标的异常表达均不同程度减轻( P< 0 . 05)。
结论 ADAM17显著促进纤维化进程, ADAM17调控ERS 的异常表达可能是其促纤维化进程的重要机制。
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