目的 通过肝左叶种植hepa1-6肝癌肿瘤组织,建立肝癌痛小鼠模型,并通过观测行为学、影像学、组织学及分子生物学相关指标,评估模型的有效性。
方法 将100 ~ 150 μL每毫升4 × 106 个hepa1-6 细胞悬液缓慢接种于小鼠前肢腋区皮下,待皮下肿瘤凸出体表,取皮下肿瘤切成大小约 1 mm × 1 mm × 1 mm 的肿瘤组织块。 将SPF级雄性C57BL/ 6J小鼠随机分为假种植( sham )组和模型( model)组,每组30 只。 模型组小鼠于肝左叶种植hepa1-6肿瘤组织块,假种植组开腹后不种植。 观察小鼠一般情况;利用弓背疼痛评分进行小鼠肝癌痛行为学评估;超声检测小鼠肝大体形态;苏木素-伊红( HE)染色观察肝组织结构、细胞构成及炎症细胞浸润情况;免疫组化( IHC)检测脊髓组织中小胶质细胞活化情况;实时荧光定量PCR( qPCR)检测脊髓组织中白细胞介素1β( IL-1β)、白细胞介素6( IL-6)和肿瘤坏死因子-α ( TNF-α )的mRNA表达;Western Blot 检测脊髓组织中IL-1β 的蛋白表达。
结果 与假种植组相比,模型组小鼠一般情况明显异常,体质量降低( P < 0. 05) ;弓背疼痛评分显著升高( P < 0. 05) ;超声示模型组小鼠肝肿瘤组织凸出;HE染色示模型组小鼠肝组织结构异常,可见大量肿瘤细胞及炎性细胞浸润;免疫组化结果显示模型组小鼠脊髓组织中小胶质细胞的标志物( ionized calcium-binding adapter molecule 1 , Iba 1)的表达显著增多;qPCR结果显示模型组小鼠脊髓组织 IL-1β、 IL-6、 TNF-α 的mRNA表达显著增多( P < 0. 05) ;Western Blot结果显示模型组小鼠脊髓组织IL-1β 的蛋白表达显著增多( P < 0. 05)。
结论 通过肝左叶种植hepa1-6肝癌肿瘤组织可以有效地建立肝癌痛小鼠模型;该方法建立的肝癌痛小鼠模型存在弓背疼痛行为学异常、肝组织形态及结构异常、疼痛因子和炎症因子活化现象,可作为肝癌痛研究的有效动物模型,为研究肝癌痛的发病机制及药物治疗效果提供有效手段。
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