目的 本研究旨在利用 CRISPR/ Cas9 系统构建 Lep 基因敲除小鼠(C57BL/ 6N-Lep em1 / Nifdc,简称 ob 小鼠),作为肥胖症、糖尿病等临床疾病体内药物评价的动物模型。
方法 根据 CRISPR/ Cas9 靶点设计原则,设计 能够靶向小鼠 Lep 基因的 sgRNA,经体外转录,与 Cas9 mRNA 一并注射入小鼠受精卵。 随后提取出生小鼠的鼠尾 DNA,采用 PCR 检测及测序技术,得到阳性小鼠。 将其与野生型小鼠进行交配传代,最终获得纯合 ob 小鼠,并对纯 合 ob 小鼠进行血清生化指标检测及肝病理检测。
结果 经鉴定,共得到 8 只阳性小鼠,经筛选传代,得到能够稳 定遗传的阳性小鼠。 纯合 ob 小鼠的血清生化指标甘油三酯( triglycerides,TG)、总胆固醇( total cholesterol,TC)、谷 丙转氨酶(alaninne aminotransferase,ALT)含量均显著高于野生型小鼠。 肝病理检测结果表明,纯合 ob 小鼠的肝中 存在明显的炎症浸润及脂肪空泡样病变。
结论 成功建立 Lep 基因敲除小鼠,丰富了国家啮齿类实验动物资源库, 为药物临床前评价提供了动物模型支持。
