目的 比较年轻与老年C57BL/6J小鼠感染甲型H1N1流感病毒后肺组织中CD8+ T细胞在收缩期及记忆性免 疫应答期的功能差异。
方法 摘取未行流感病毒感染的年轻 （3月龄） 与老年 （24月龄） 雌性C57BL/6J小鼠肺组 织，制备单细胞悬液，分别用佛波酯 （phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA） /离子霉素或分化簇 （cluster of differentiation，CD） 3/CD28抗体 （T细胞抗原受体/共刺激信号） 进行非特异性抗原刺激，通过流式细胞术对肺 CD8+ T细胞行细胞内细胞因子染色 （flow cytometry intracellular cytokine staining，ICS） 以检测其分泌肿瘤坏死 因子-α （tumor necrosis factor-α，TNF-α） 和干扰素-γ （interferon-γ，IFN-γ） 的能力。以490 PFU PR8流感病毒 滴鼻感染年轻和老年C57BL/6J小鼠，28天后进行同源流感病毒的二次感染，于初次感染后第28天 （收缩期）、第 32天 （记忆性免疫应答期） 分离肺组织，采用流感病毒特异性MHC-Ⅰ四聚体染色法检测病毒特异性CD8+ T细胞 在肺组织CD8+ T细胞中的比例，ICS法分析CD8+ CD44highT细胞亚群TNF-α、IFN-γ及颗粒酶B （granzyme B） 的 表达。
结果 非特异性抗原刺激后，老年组小鼠的肺组织CD8+ T细胞中TNF-α、IFN-γ分泌能力显著高于年轻组 （P＜0.05）。病毒特异性抗原刺激后，收缩期的两组小鼠间病毒特异性 CD8+ T 细胞比例以及 TNF-α、IFN-γ、 granzyme B的表达水平差异均无统计学意义 （P＞0.05）；而在记忆性免疫应答期，老年组小鼠的病毒特异性CD8+ T 细胞比例以及TNF-α、IFN-γ、granzyme B的表达水平均显著低于年轻组 （P＜0.05）。
结论 老年小鼠肺部CD8+ T 细胞在非特异性抗原刺激下免疫相关因子表达功能正常，但在抗原特异性记忆免疫应答阶段的免疫相关因子表达功 能受损，提示衰老导致CD8+ T细胞免疫记忆形成或维持发生缺陷。
