目的 本研究旨在探讨宣肺化浊丸( XuanFei HuaZhuo Pill , XFHZP )对湿热型肺炎( damp-heat pneumonia ,DH)作用,并通过蛋白质组学技术揭示其治疗DH 的机制,为中医药治疗肺炎提供实验依据。
方法 建立DH大鼠模型,通过体征观察及评分(一般情况、舌、耳、爪甲、尿液、粪便) ;肺指数;肺组织苏木素-伊红( HE)染色;肺组织白介素-6 ( IL-6)和肿瘤坏死因子-α ( TNF-α )的酶联免疫吸附测定法( ELISA)测定;血细胞计数:白细胞( WBC)、中心粒细胞( Gran)、单核细胞( Mon)、平均血小板体积( MPV) ;大鼠肺功能检测呼吸频率( F)和分钟通气量( MV)等,明确XFHZP治理DH 的疗效。 利用Astral DIA定量蛋白组学技术检测空白对照( control ,CON)组、DH组和XFHZP + DH组大鼠的右肺下叶,分析CON组和DH组、 DH组和XFHZP + DH 组之间的差异表达蛋白( DEPs)。 并通过生物信息学进行DEPs 的 KEGG 富集分析。 采用免疫组化分析代表性DEPs 的表达,采用Western Blot对DEPs及其下游蛋白的表达含量进行检测和验证。
结果 与CON组相比,DH组大鼠出现狂躁、舌色红、耳背血管充盈、尿液色黄及粪便粘滞等症状;肺指数升高,肺组织HE染色出现肺泡壁增厚,炎细胞浸润,肺泡毛细血管充血扩等病变,肺组织中IL-6及TNF-α含量显著升高( P < 0. 05) , WBC、 Gran、 Mon、 MPV及F显著升高( P < 0. 05) ,MV显著降低( P < 0. 05)。 与DH组相比,XFHZP + DH组肺指数降低,肺组织HE染色观察到充血情况及肺组织炎性细胞浸润明显减轻,肺组织中 IL-6及TNF-α含量显著降低( P < 0. 05) ,WBC、 Gran、 Mon、 MPV及F显著降低( P < 0. 05) ,MV显著升高( P < 0. 05)。 蛋白质组学分析,表明CON组和DH组大鼠肺组织中有1348个DEPs ,DH组和XFHZP + DH组大鼠肺组织中有448个差异蛋白,其中包括AAK1、 CACNα1δ1、 eIF4E、 HSD11β1、 ROCK1、 TDP1等。 DEPs 的 KEGG通路富集分析显示, cGMP-PKG信号通路和胰岛素信号通路可能是XFHZP治疗DH 的关键信号通路。 免疫组化结果显示, DH大鼠肺组织中ROCK1和MKNK1 的表达均上调,XFHZP治疗后均下调。 Western Blot实验进一步表明 DH大鼠肺组织中ROCK1和MKNK1 的表达均上调,增加了 MLC2 和 eIF4E 的磷酸化; XFHZP 通过抑制 ROCK1 和 MKNK1 的表达,减少MLC2和eIF4E 的磷酸化,从而舒张气道平滑肌并抑制炎性因子释放。
结论 XFHZP对 DH具有显著的疗效,其作用机制可能通过调控ROCK1和MKNK1 的表达,抑制MLC2和eIF4E 的磷酸化,进而舒张气道平滑肌并减轻炎症反应。 本研究为XFHZP治疗DH提供了分子层面的科学依据,并为中医药治疗肺炎的机制研究提供了新思路。
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