目的 探讨针刺对创伤性颅脑损伤( traumatic brain injury ,TBI)后昏迷大鼠的促醒机制。
方法 SD大鼠随机分为空白组、模型组、溶剂对照组、针刺组、嘌呤能P2X7受体( P2X purinoceptor 7 ,P2RX7)拮抗剂组,每组12只。 用控制性皮质撞击造模法( electric controlled cortical impactor ,eCCI)造模,溶剂对照组、针刺组和P2RX7拮抗剂组分别于中脑腹侧导水管周围灰质( ventral periaqueductal gray ,vPAG)区注射DMSO溶液或 P2RX7拮抗剂30 min后造模,针刺组和P2RX7拮抗剂组造模后予百会、水沟穴针刺。 通过昏迷时间、意识状态、mNSS评分评估行为学,苏木素-伊红( HE )和尼氏染色观察 vPAG 区组织形态, ELISA 检测多巴胺( dopamine , DA )水平,免疫荧光、 Western Blot 和 RT-qPCR 检测 P2RX7 和多巴胺转运蛋白( dopamine transporter ,DAT)表达。
结果 与空白组相比,模型组、溶剂对照组和P2RX7拮抗剂组昏迷时长延长、各时间点的意识状态和mNSS评分升高( P < 0. 05) ,vPAG 区出现神经元变性、核固缩及尼氏小体增加等病理改变,且vPAG 区DA水平、P2RX7和DAT表达降低( P < 0. 05) ;针刺组TBI术后2. 5 和4 h 的意识状态得分、 TBI 术后12 h 的mNSS评分升高( P < 0. 05) ,且vPAG 区存在部分神经元变性、核固缩及尼氏小体增加等病理改变。 与模型组相比,针刺组的昏迷时长缩短、各时间点的意识状态和mNSS评分降低( P < 0. 05) ,vPAG 区组织和神经元损伤减轻,DA水平、P2RX7和DAT表达升高( P < 0. 05)。 与溶剂对照组相比,针刺组昏迷时长缩短,TBI术后12、 24、 48 h 的意识状态得分及TBI术后24、 48 h 的mNSS评分降低( P < 0. 05) ,vPAG 区组织和神经元损伤减轻,DA水平、P2RX7和DAT表达升高( P < 0. 05)。 与针刺组相比,P2RX7拮抗剂组的昏迷时长延长、各时间点的意识状态得分和mNSS评分升高( P < 0. 05) ,vPAG 区组织和神经元损伤增加, DA水平、 P2RX7和DAT表达降低( P < 0. 05)。
结论 针刺百会、水沟穴可能通过上调P2RX7表达以调控DA系统相关因子DAT和DA ,恢复vPAG 区病理改变,改善意识状态和神经功能,进而促醒TBI后昏迷大鼠。
