目的 探讨磷脂酶 D1(PLD1)介导的线粒体功能对支气管肺发育不良(BPD)模型小鼠肺的作用。
方法 将 18 只 WT 小鼠和 18 只 PLD1 基因敲除(PLD1-KO)小鼠分为以下 4 组:常氧+WT、常氧+PLD1- KO、高氧+WT、高氧+PLD1-KO 组,每组 9 只。 高氧组新生小鼠暴露于高氧条件(85% O2 )14 d。 常氧组新生 小鼠暴露于常氧条件(21% O2 )14 d。 在第 14 天时,通过丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、蛋 白免疫印迹(BAX、BCL-2、Cleaved Caspase-3)、免疫组织化学(α-SMA、AIF)评估小鼠肺的氧化应激、凋亡和纤 维化水平。 将 MLE-12 细胞分为常氧+si-NC、高氧+si-NC、常氧+si-PLD1、高氧+si-PLD1 组。 瞬时转染后,将细 胞暴露于常氧或高氧中 24 h。 通过 MitoSOX Red、海马线粒体应激试验测定线粒体活性氧(mtROS)和功能。
结果 与常氧组相比,高氧组小鼠肺组织的 α-SMA、AIF 阳性染色、MDA、Cleaved Caspase-3 和 BAX 显著增加 (P<0. 05),SOD 活性、BCL-2 的丰度显著降低(P<0. 05),并且高氧+PLD1-KO 组小鼠肺组织的 α-SMA、AIF 阳 性染色、Cleaved Caspase-3 和 BAX 的丰度较高氧+WT 组显著降低(P<0. 05),SOD 活性、BCL-2 丰度较高氧+ WT 组显著增加(P< 0. 05)。 与常氧组相比,高氧组 MLE-12 细胞中 AIF 在线粒体中的表达显著减少( P< 0. 05),在细胞质中的表达显著增加(P<0. 05),并且与高氧+si-NC 组相比,高氧+si-PLD1 组 MLE-12 细胞中 AIF 在线粒体中的表达显著增加(P<0. 05),在细胞质中的表达显著减少(P<0. 05)。 高氧组 MLE-12 细胞中 mtROS 丰度较常氧组显著增加(P<0. 05),其中,高氧+si-PLD1 组 MLE-12 细胞中 mtROS 丰度较高氧+si-NC 组 显著减少(P<0. 05)。 与常氧+si-NC 组相比,高氧+si-NC 组基础呼吸、ATP 生成、最大呼吸、备用呼吸能力显 著降低(P<0. 05)。 与高氧+si-NC 组相比,高氧+si-PLD1 组基础呼吸、ATP 生成、最大呼吸、备用呼吸能力显 著增加(P<0. 05)。
结论 PLD1 参与高氧诱导的小鼠 BPD 和 MLE-12 细胞损伤,PLD1 基因缺失可能通过抑 制线粒体依赖性凋亡,减轻高氧诱导的肺损伤。
