目的 研究远隔缺血预适应(RIPC) 是否通过血浆外泌体降低神经细胞 DNA 甲基转移酶 (DNMTs)水平,从而发挥低氧缺血神经保护作用。
方法 C57BL / 6J 小鼠 RIPC 同时尾静脉注射外泌体抑制 剂 GW4869,1 h 后进行大脑中动脉闭塞(MCAO),并将小鼠随机分为 4 组,Bederson 评分及转角实验评估神经 功能损伤程度;采用实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot) 检测小鼠大脑皮层中 DNMTs 及神经损伤相关基因的表达水平。 分离小鼠 RIPC 前后的血浆外泌体,与小鼠海马神经细胞 HT22 共 培养后进行氧糖剥夺(OGD)处理,通过 CCK8 检测细胞活力;免疫荧光观察细胞形态及抗凋亡蛋白 Bcl-2 的荧 光强度;检测细胞中 DNMTs 及相关凋亡基因 ( Caspase3、 BAX、 Bcl-2) 的 mRNA 和蛋白表达水平。
结果 Bederson 评分及转角实验结果显示,RIPC 干预可显著改善小鼠 MCAO 后的神经功能缺损,且其神经保护作用 在给予 GW4869 后明显减弱(P<0. 05)。 RIPC 处理可下调 MCAO 小鼠大脑皮层中 DNMTs、Caspase3 和 BAX 的表达(P<0. 05),上调 Bcl-2 的表达。 体外实验结果显示,RIPC 后血浆外泌体可降低 OGD 条件下 HT22 细胞 中 DNMTs 的表达,增强 Bcl-2 的荧光强度并改善细胞形态,同时下调 Caspase3 和 BAX 的表达,提升细胞活力 (P<0. 05)。
结论 RIPC 可能通过血浆外泌体途径下调神经细胞 DNMTs 表达,并抑制 Caspase3、BAX 的表 达,使 Bcl-2 表达增加,抑制神经元凋亡,增强神经细胞对低氧缺血环境的耐受性,从而发挥神经保护作用。
