目的 本研究旨在阐明鳖甲煎丸(Biejiajian pill,BJJP)含药血清对肝癌 Huh7 细胞恶性生物行 为的作用及机制。
方法 通过趋化素样因子超家族 6 的 siRNA 敲降细胞中 CMTM6 表达。 利用健康 SD 大鼠 制备正常大鼠血清以及低(0. 55 g / kg)、中(1. 1 g / kg)、高(2. 2 g / kg)浓度的 BJJP 含药血清,对数生长期的肝 癌 Huh7 细胞分别给予正常胎牛血清( BC)、正常大鼠血清(NC) 培养及低、中、高剂量的 BJJP 含药血清 (LBJJP、MBJJP 和 HBJJP)培养。 BJJP 含药血清和 si-CMTM6 分别作用于肝癌 Huh7 后,通过 CCK-8 法评估细 胞的增殖能力、Transwell 检测细胞的迁移与侵袭能力,利用 Western blot 检测增殖核抗原( proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、上皮-间质转化(EMT)关键标志物及 CMTM6 的蛋白表达。
结果 敲降 CMTM6 后,与 阴性对照组(si-NC)相比,敲降 CMTM6 组(si-CMTM6)能够降低 Huh7 细胞中 CMTM6 mRNA 和蛋白的表达(P <0. 05)。 与 BC 组相比,NC 组 Huh7 细胞的增殖、迁移、侵袭数量及 PCNA、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 和 CMTM6 蛋白表达水平均无明显差异(均 P>0. 05)。 经 BJJP 含药血清处理后,Huh7 细胞的增殖速率显著降 低,迁移及侵袭细胞数减少(P<0. 05);Western blot 分析显示,与正常大鼠血清组相比 BJJP 含药血清处理组 PCNA、CMTM6、N-cadherin 及 Vimentin 蛋白表达量显著下调,而 E-cadherin 表达量显著上调(均 P< 0. 05)。 CMTM6 敲降后,可有效抑制 Huh7 细胞的增殖、迁移、侵袭能力,同时伴随 PCNA、Vimentin、N-cadherin 蛋白下 调及 E-cadherin 蛋白上调(均 P<0. 05)。
结论 BJJP 含药血清可显著抑制 Huh7 肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移 及 EMT 进程,且呈剂量依赖性;该作用可能与下调 CMTM6 蛋白表达有关。
