目的 探讨黑皮质素受体激动剂( MT-II)改善SH3和多个锚蛋白重复结构域3( Shank3)基因缺陷孤独症模型鼠社交缺陷的作用机制。
方法 利用Shank3干扰慢病毒和空载慢病毒注射至仔鼠右侧脑室构建Shank3模型鼠和空载鼠各18只,Shank3组随机分为Shank3+ Sal ( Sh3-Sal)组9 只和Shank3+ MT-II( Sh3-MT-II)组9只,空载组随机分为空载+ Sal ( V-Sal)组9 只和空载+ MT-II( V-MT-II)组9 只。 V-MT-II组和 Sh3-MT-II组于第28天腹腔注射3. 3 mL/ kg MT-II ,V-Sal组和Sh3-Sal组腹腔注射3. 3 mL/ kg 0. 9%氯化钠溶液,通过旷场实验、理毛实验、三箱社交实验及Morris水迷宫实验评估其行为学改变;采用逆转录聚合酶链式反应( RT-PCR)和蛋白免疫印迹( Western blot)检测下丘脑催产素( OXT)、催产素受体( OXTR)及黑皮质素受体4 ( MC4R)的mRNA与蛋白表达水平。
结果 行为学结果显示,三箱社交实验中与陌生鼠 1相比, Sh3-Sal组未表现出社交差异( P>0. 05) ,而MT-II干预后,Sh3-MT-II组与陌生鼠2 的社交时间显著增加,差异有统计学意义( P<0 . 01)。 Morris水迷宫实验中与V-Sal组相比,Sh3-Sal组表现出显著的学习记忆障碍( P< 0 . 05) ,而MTII干预后,Sh3-MT-II组学习记忆能力明显提高,差异有统计学意义( P< 0 . 01)。 旷场实验和理毛实验结果显示,与V-Sal组相比,Sh3-Sal组周边停留时间及理毛时间均显著增加,差异有统计学意义( P< 0 . 01) ;MT-II干预后,旷场中心停留时间及理毛行为与Sh3-Sal组无显著差异( P>0. 05)。 RT-PCR检测显示,与Sh3-Sal组相比,Sh3-MT-II组OXT、OXTR和MC4R mRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义( P<0 . 05) ;Western blot法检测显示,与Sh3-Sal组相比, Sh3-MT-II组大鼠下丘脑OXT蛋白表达水平明显升高( P< 0 . 05) ,与V-Sal组相比,Sh3-Sal组和Sh3-MT-II组大鼠下丘脑 SHANK3蛋白表达水平明显降低( P< 0 . 05 , P < 0 . 01) ,而 OXTR及 MC4R蛋白表达水平无显著差异( P>0. 05)。
结论 黑皮质素受体激动剂MT-II可能通过激活下丘脑OXT系统改善Shank3缺陷孤独症模型鼠的社交障碍,提示靶向 OXT/ MC4R通路或为孤独症社交缺陷的潜在干预策略。
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