目的 探讨小干扰RNA( siRNA)靶向抑制骨桥蛋白( OPN)表达后对肝癌细胞Warburg效应的影响及其作用机制。
方法 将靶向 OPN 的 siRNA ( si-OPN)及阴性对照序列( si-NC)分别转染肝癌细胞 HepG2和SK-HEP-1。 采用2-NBDG荧光探针法检测肝癌细胞的葡萄糖摄取能力,乳酸试剂盒检测肝癌细胞乳酸生成情况。 采用RT-qPCR及Western blot检测肝癌细胞中糖酵解相关的葡萄糖转运蛋白( GLUT1)、己糖激酶2( HK2)及乳酸脱氢酶A( LDHA)的表达变化。 在HepG2和SK-HEP-1细胞中沉默半乳糖凝集素3结合蛋白( LGALS3BP)表达以及干扰OPN后再过表达LGALS3BP。 Western blot分别检测肝癌细胞中 LGALS3BP 及糖酵解相关基因GLUT1、 HK2及LDHA 的表达变化,2-NBDG法检测细胞葡萄糖摄取能力,乳酸试剂盒检测乳酸生成情况。
结果 与未转染( Control)组和si-NC组相比,干扰OPN( si-OPN)组的HepG2和SK-HEP-1细胞对葡萄糖的摄取量及乳酸生成量均显著降低( P< 0 . 05) ,同时 GLUT1、 HK2及LDHA基因在mRNA及蛋白水平的表达均显著降低( P<0 . 05)。 HepG2和SK-HEP-1细胞中干扰OPN后LGALS3BP 的蛋白表达下调( P< 0. 05) ,干扰LGALS3BP后葡萄糖摄取量和乳酸产量的水平显著降低( P<0 . 05) ,GLUT1、 HK2及LDHA 的蛋白表达显著降低( P< 0 . 05)。 干扰OPN 的 HepG2和SK-HEP-1细胞中过表达LGALS3BP后发现受抑制的糖酵解代谢相关指标均得到恢复,表明 OPN通过 LGALS3BP 促进肝癌细胞糖酵解代谢。
结论 OPN通过上调 LGALS3BP促进糖酵解相关基因的表达,从而增强肝癌细胞的Warburg效应。
