目的 基于网络药理学、分子对接及体外实验探究熊果酸抗矽肺纤维化的作用机制。
方法 通过GeneCards、 PubChem等数据库获取熊果酸作用靶点;检索疾病相关数据库( GeneCards、 OMIM)获得矽肺纤维化及上皮间质转化( EMT)相关靶点。 利用微生信平台筛选交集靶点,通过STRING数据库和 Cytoscape 构建蛋白互作网络,筛选核心靶点;采用David数据库进行GO和KEGG富集分析;运用AutoDock进行分子对接验证。 通过beas-2B细胞实验验证关键靶点。
结果 获得熊果酸作用靶点179个,矽肺纤维化及EMT相关靶点分别为8023个和6809个,交集靶点133个。 筛选出AKT、 STAT3、 MMP9等9个核心靶点,其中MMP9和 AKT在PPI 网络中具有最高连接度。 分子对接显示熊果酸与MMP9(结合能-8 . 4 kJ/mol)、 AKT(结合能-7 . 9 kJ/mol)具有强结合活性。 KEGG分析提示PI3K-AKT信号通路为关键调控通路。 体外实验表明,熊果酸显著抑制SiO2诱导的细胞活力下降( CCK8) ;降低p-AKT表达( Western blot ,P < 0 . 05) ;下调纤维化标志物α-SMA 和间质标志Vimentin表达,同时上调上皮标志物 E-cadherin 表达(免疫荧光/ Western blot , P < 0 . 05)。
结论 熊果酸可能通过抑制AKT磷酸化及MMP9表达,调控EMT进程,从而发挥抗矽肺纤维化作用。
