目的 探讨栀子苷调控单磷酸腺苷活化蛋白激酶( AMPK) / 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) / Unc-51 样激酶 1(ULK1)通路对肺癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响。
方法 A549 细胞分为肺癌组、 栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组、AMPK 激活剂(MK8722)组、栀子苷高剂量+AMPK 抑制 剂(Compound C)组,5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、CCK-8 法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞 凋亡;透射电镜观察 A549 细胞中自噬小体数;RT-qPCR 检测 A549 细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、p53、p62、 Bcl-2 同源结构域蛋白(Beclin1) mRNA 表达;Western blot 检测 A549 细胞微管相关蛋白 1 轻链 3( LC3)、pAMPK、p-mTOR、p-ULK1 蛋白。
结果 与肺癌组比较,栀子苷低、中、高剂量组 A549 细胞 EdU 阳性率、OD450 值、PCNA、p62 mRNA 及 p-mTOR 蛋白降低,细胞凋亡率、自噬小体数、p53、Beclin1 mRNA 及 LC3-II/ LC3-I、pAMPK、p-ULK1 蛋白升高,且栀子苷高剂量组趋势最明显(P< 0. 05);与肺癌组比较,MK8722 组 A549 细胞 EdU 阳性率、OD450 值、PCNA、p62 mRNA 及 p-mTOR 蛋白降低,细胞凋亡率、自噬小体数、p53、Beclin1 mRNA 及 LC3-II/ LC3-I、p-AMPK、p-ULK1 蛋白升高(P<0. 05);与栀子苷高剂量组比较,栀子苷高剂量+Compound C 组 A549 细胞 EdU 阳性率、OD450 值、PCNA、p62 mRNA 及 p-mTOR 蛋白升高(P<0. 05),细胞凋亡率、自噬小体 数、p53、Beclin1 mRNA 及 LC3-II/ LC3-I、p-AMPK、p-ULK1 蛋白降低(P<0. 05)。
结论 栀子苷可能通过激活 AMPK/ mTOR/ ULK1 通路抑制 A549 细胞增殖,促进细胞自噬和凋亡。
