目的 构建背根神经节（ＤＲＧ）与成纤维样滑膜细胞（ＦＬＳｓ）共培养的膝骨关节炎（ＫＯＡ）离体 模型，研究棘突旁指压式机械刺激诱导感觉神经元瞬时感受器电位离子通道 Ｖ１（ＴＲＰＶ１）脱敏及其减轻 ＦＬＳｓ 炎性反应的效应机制。
方法 免疫荧光法鉴定 ＤＲＧ 神经元细胞；通过 ＦＸ⁃６０００ Ｔ 细胞应力系统实现对 ＤＲＧ 神经元细胞的牵张应力加载，ＣＣＫ⁃８ 法测定不同强度的机械应力对 ＤＲＧ 神经元细胞活性的影响；流式细胞术 研究各组 ＤＲＧ 神经元细胞的 Ｃａ ２＋离子通量；运用 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ 小室与 ＦＬＳｓ 建立共培养体系，ＥＬＩＳＡ 测定细胞上 清液中促炎因子 ＩＬ⁃１β、ＴＮＦ⁃α，促纤维化标记物 ＴＧＦ⁃β 的含量；ＲＴ⁃ｑＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分别检测 ＤＲＧ 神经元 细胞中 ＴＲＰＶ１ 及其脱敏负调控蛋白 ＰＰ２Ｂ、ＣａＭ，以及 ＦＬＳｓ 中 ＩＬ⁃１β、ＴＮＦ⁃α、ＴＧＦ⁃β、α⁃ＳＭＡ 的基因和蛋白表达 水平。
结果 炎性环境下 ＤＲＧ 神经元中 Ｃａ ２＋离子通量增加，低强度（正弦波，２％，１ Ｈｚ，６ ｈ）指压式机械刺激 未能引起 Ｃａ ２＋离子通量变化（Ｐ＞０. ０５），中强度（正弦波，４％，１ Ｈｚ，６ ｈ）和高强度（正弦波，８％，１ Ｈｚ，６ ｈ）指压 式机械刺激均使 Ｃａ ２＋离子通量进一步增加（Ｐ＜０. ０５），但高强度刺激不再进一步增加中强度的 Ｃａ ２＋离子通量 （Ｐ＞０. ０５）；低强度指压式机械刺激对 ＤＲＧ 神经元细胞中 ＴＲＰＶ１、ＰＰ２Ｂ、ＣａＭ 的基因和蛋白表达，共培养细胞 上清液中 ＩＬ⁃１β、ＴＮＦ⁃α、ＴＧＦ⁃β 的含量，以及 ＦＬＳｓ 中 ＩＬ⁃１β、ＴＮＦ⁃α、ＴＧＦ⁃β、α⁃ＳＭＡ 的基因和蛋白表达均无干预 作用（Ｐ＞０. ０５）；中、高强度指压式机械刺激上调炎性组 ＤＲＧ 神经元细胞的 ＴＲＰＶ１ 基因和蛋白表达（ Ｐ＜ ０. ０５），但下调 ＰＰ２Ｂ、ＣａＭ 的基因和蛋白表达（Ｐ＜０. ０５）；中、高强度的指压式机械刺激减少了共培养细胞上清 液中 ＩＬ⁃１β、ＴＮＦ⁃α、ＴＧＦ⁃β 的含量（Ｐ＜０. ０５），下调 ＦＬＳｓ 中 ＩＬ⁃１β、ＴＮＦ⁃α、ＴＧＦ⁃β、α⁃ＳＭＡ 的基因和蛋白表达（Ｐ ＜０. ０５）。
结论 中、高强度指压式机械刺激诱导大鼠感觉神经元 ＴＲＰＶ１ 脱敏，减少疼痛介质释放，并通过下 调 ＩＬ⁃１β、ＴＮＦ⁃α、ＴＧＦ⁃β 的分泌抑制 ＦＬＳｓ 的炎性反应。
