目的 探究 C1q 肿瘤坏死因子相关蛋白 3(CTRP3)调控仙台病毒( SeV)载体过表达 Gata4、 Mef2c 和 Tbx5(SeVGMT)重编程心脏纤维母细胞(CFs)为心肌样细胞( iCMs)的效率及作用机制。
方法 将 CFs 分为 Control 组、NC-Lv 组、CTRP3-Lv 组、NC-sh 组和 CTRP3-sh 组。 使用 Lipofectamine 3000 试剂将 NC-Lv、 CTRP3-Lv、NC-sh 和 CTRP3-sh 转染至 CFs,转染 48 h。 然后将 Lipofectamine 3000 试剂与 SeVGMT 混合并在室 温下孵育 48 h,更换培养基后继续培养 21 d。 显微镜下观察不同培养时间点(0、3、7、14、21 d)的细胞形态。 通过细胞免疫荧光、RT-qPCR 和 Western blot 检测不同时间点的心肌特异性蛋白 α-MHC、α-actin、cTnT、Cx43、 Actc1 和 Myh6 的表达,并计算不同时间点的跳动细胞比例。
结果 随着培养时间的延长,各组 CFs 中 α- MHC、α-actin、cTnT、Cx43、Actc1 和 Myh6 的相对荧光强度、mRNA 和蛋白水平均显著升高(P<0. 05),并且培养 14 d 时的上述心肌特异性蛋白的表达水平较培养 7 d 时大幅度升高(P<0. 05)。 培养 3、7、14 和 21 d 时,与 NC-Lv 组比较,CTRP3-Lv 组 CFs 中 α-MHC、α-actin、cTnT、Cx43、Actc1 和 Myh6 的相对荧光强度、mRNA 和蛋白 水平显著升高(P<0. 05)。 与 NC-sh 组比较,CTRP3-sh 组 CFs 中 α-MHC、α-actin、cTnT、Cx43、Actc1 和 Myh6 的 相对荧光强度、mRNA 和蛋白水平均显著降低(P<0. 05)。 培养 7 d 时,各组 CFs 中出现跳动细胞,随着培养时 间的延长,各组 CFs 中的跳动细胞比例显著升高(P<0. 05),并且培养 14 d 时的跳动细胞比例较培养 7 d 时大 幅度升高(P<0. 05)。 培养 7、14 和 21 d 时,与 NC-Lv 组比较,CTRP3-Lv 组 CFs 中的跳动细胞比例显著升高 (P<0. 05)。 与 NC-sh 组比较,CTRP3-sh 组 CFs 中的跳动细胞比例显著降低(P<0. 05)。
结论 CTRP3 可增 强 SeVGMT 重编程 CFs 为 iCMs。
